[技巧经验]血凝抑制试验操作注意事项:(微量法)

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sharebio 2012-08-28 13:34:01

1、温度和时间的把握各个材料,如生物制品规程、传染病学(北京出版社2000版)、传染病实验学(西北农大版)等等各个地方标注的均不一样,以上说法均为正确。但是南方北方、有空调和无空调的室温、冬天夏天室温等等的湿毒温度均不一样,所以一定要把握自己的原则,到底该遵从半个小时还是45min还是一个小时,包括中和时间还是加入红细胞的等待时间,我一般是按照这样的原则,室温和等待时间成反比关系,当然不是说室温越高越好,时间越短越好,针对不同的抗原把握的原则是不一样的,如传支HI的4单位抗原(有的用8单位抗原)和血清稀释的中和时间一般我在4℃反应45min,同样的原理我们在室温下冬天反应禽流感或者新城疫或者减蛋等时也相应延长,但是在夏天就应减少,但是不能少于20分钟(说是15min的书上我觉得有点过分了,没有临床实践的人瞎编的书),也就是说在夏天北方室内温度28℃时反应温度在25min,在冬天延长至35分钟到45分钟,在春夏季节可以保持在30min。但是在南方室内温度高湿度大可以减少至20min,冬天在30min,春秋季节在25min即可。

同样的道理加入红细胞的判定时间也是决定抗体高低的关键因素,我这里有照片在早判定和晚判定大多数会高低相差1log2,也就是2倍,经常实践操作的人一定知道这个误差的,因此何时为最佳判定时间呢?我个人认为不能简单的按照书上说的30min后判定,应该按照你的阴性和阳性对照的最佳沉淀和凝集时间,因为你的阴性对照会沉淀,阳性对照会凝集,这个时间是可以随你的加样的准确性和环境的温湿度而变化的,也就是你的最佳坐标,所以红细胞加入后判定结果的时间就是你的阴阳性对照成立的那一刻,即为你结果出现的时刻。

2、关于50%和100%凝集的判定:这也是操作者头疼的问题,有时候似凝非凝似陈非沉的很难判定,这个决定我告诉你就更简单了,严格判定,完全按照100%沉淀(血凝抑制)或者凝集(血凝实验)即可。把所有似是而非的东西东摒弃,就是一刀切,严格在严格的判定,宁低不宁高。

3、4单位抗原的标定:这是血凝试验很重要的关键因素,做实验的人善于思考的人一定会很重视4单位抗原的重要性。

但是我问大家为什么是4单位抗原而不是5单位6单位呢?为什么传支有时候又是8单位抗原呢?到底4单位抗原这个标尺怎么标定?怎么判定?怎么稀释?加样时需要注意些什么呢?

4、鸡场(养殖场)和实验室(研究所、大专院校)操作存在异同点等等。其他的细小细节等等等········
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