[技巧经验]感受态细胞转化效率的检验

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sharebio 2012-09-06 11:04:51

为确定感受态细胞的转化效率,可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中,取一部分转化的细菌,涂布到选择培养基上,可用菌落生长单位/μg DNA,按下面的方法计算感受态细胞的转化效率.计算公式:转化效率=产生菌落的总数/铺板DNA的总量。

例如,取1μl(0.1 ng/μl)完整的质粒转化100μl的感受态细胞. 向转化反应液中加入900μl培养液,让细菌恢复一小段时间,取100μl铺板.培养过夜,产生1000个菌落。转化0.1 ng DNA,用SOC稀释到1000μl后,取1/10涂平板,则涂平板共用0.01 ng DNA 质粒,所以转化率=1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg。

转化效率1×10 6 cfu/μg DNA可满足普通的亚克隆实验;1×10 7 cfu/μg DNA用于作更复杂的亚克隆,有限量的DNA的转化,T-克隆实验;构建文库和突变要求用的转化的效率为>1×10 8 cfu/μg DNA。
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