现在位置 >首页 > 所有属于实验分类文章
0+
发表于13 天前 实验 ⁄ 被围观 13+
ELISPOT全名为酶联免疫斑点检测,英文:Enzyme-linked Immunospot Assay。它结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(即ELISA技术),能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理,一句话概括就是:用抗 体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子,并以酶联斑点显色的方式将其表现出来(Sedgwick JD 2005)。 该技术检测细胞因子具有三大优点:其一,灵敏度高。在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。这是目前为止,最为灵敏的检测 技术,灵敏度比传统的的ELISA方法高2-3个数量级...
阅读全文

0+
发表于14 天前 实验 ⁄ 被围观 11+
ELISPOT技术的独特优点已经让它在抗原特异性T细胞免疫学研究上独占鳌头。它是当今唯一能够检测到到百万分之一阳性细胞率的检测技术。如此高的灵敏 度就连流式细胞技术(细胞内细胞因子染色)和tetramer技术也望尘莫及(Letsch A et. al., 2003)。此外由于淋巴细胞的冻存复苏问题也得到了完美的解决,经过冻存复苏的细胞并不丧失免疫功能(Maecker HT et. al., 2005;Kvarnstrom M et. al., 2004)。这一点对临床试验非常重要,它使科研人员得以并行分析免疫治疗前、后的病人血样。如果试验牵涉全国乃至全球多...
阅读全文
0+
发表于38 天前 实验 ⁄ 被围观 35+
第一天:ELISPOT包被程序,提供两种方案供选择(严格注意无菌操作)   方案A: 传统酒精预湿包被程序 该方案中,需经过:70%乙醇预湿PVDF膜、无菌去离子水洗涤去除乙醇、拍干,最后,加入已稀释好的包被抗体到各实验孔完成包被操作。 具体操作如下: 1.          实验卡片填写:设计好试验,把每个孔要加入的内容做成卡片,到时候就会从容很多。 2.          每孔加入15μL 70%的乙醇预湿。 注意: ²      未润湿PVDF膜是洁白、不透明的;经乙醇润湿后,颜色变暗,呈半透明状,很容易观察二者的区别。 ²      加乙...
阅读全文
5+
发表于246 天前 实验, 资源 ⁄ 被围观 1,702+
一、Western实验方法及疑难解答 In-Cell Western™ 操作方法 Western Blot Reprobing 实验方法 Western免疫印迹常见问题解答 Western免疫印迹方法 荧光Western免疫印迹方法.doc 二、免疫组化实验步骤及疑难解答 免疫组化方法(冰冻切片) 免疫组化方法(石蜡切片) 三、免疫荧光实验方法及疑难解答 甲醇打孔的免疫荧光实验方法 免疫荧光检测步骤 生物素标记抗体的免疫荧光检测方法 四、ELISA实验步骤及疑难解答 PathScan®化学发光ELISA操作方法 PathScan®夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)抗体配对方案 PathSca...
阅读全文
2+
发表于249 天前 实用, 实验 ⁄ 被围观 1,497+
此篇文章转自生物通的一篇新技术投递,供参考,有兴趣的可以网上搜索Cisbio Bioassays公司HTRF磷酸化蛋白测量试剂! 检测原理 实验可在细胞裂解液或者完整细胞中进行。当受体被刺激 后,引发了相关激酶的活化,导致下游蛋白被磷酸化。细胞膜裂解之后,磷酸化的蛋白释放出来,被HTRF试剂检测到。磷酸化蛋白的测量应用了双抗体夹心法, 两个抗体均为单克隆抗体。其中一个为抗磷酸化蛋白的抗体,标记Eu;另一个为抗蛋白其它位点的抗体,标记d2,见图1。这些抗体可以预先混合后,通过一次 加样来完成。所有的实验均可...
阅读全文
1+
发表于275 天前 实验, 资源 ⁄ 被围观 8,721+
核酸纯化与分析 DNA Analysis Protocols |   DNA Extraction Protocols |   mRNA Protocols 核酸扩增和表达谱分析 cDNA Protocols |   DNA Extraction Protocols |   PCR Protocols 克隆 Cloning Protocols |   Competent Cell Protocols |   Ligation Protocols |   Transformation Protocols 蛋白质、表达、分离和分析 Antibody Protocols |   Cell Separation Methods |   GFP Protocols |   Immunoprecipitation Protocols |   Protein Expression Protocols |   Protein Isolation Protocols |   Protein...
阅读全文
4+
发表于287 天前 实验, 资源 ⁄ 被围观 1,392+
所谓的宝典只不过是些操作经验,不过也值得借鉴!老手直接忽视吧! 1、要保证移液枪的准确性,误差不能超过2%。可用水和电子天平进行校正。校正方法自己放狗吧,但最好有专业人员进行矫正。 2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支(靠,基本是废话了)。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时(应该是特别是!)。 3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定(这个是容易忽视的!)。 4、实验时,要使底物避光保存。 5、用枪吸取液体时速度不能太快...
阅读全文
0+
发表于288 天前 实验, 资源 ⁄ 被围观 7,726+
纯属转载,可以去百度(没办法又给GRD做了广告)文库下载: http://wenku.baidu.com/view/74ceb442a8956bec0975e33d.html
阅读全文
1+
发表于288 天前 实验 ⁄ 被围观 2,360+
一、实验目的: 1、根据目前市场对克伦特罗ELISA试剂盒的要求,研制符合市场需求的ELISA试剂盒产品; 2、结合目前实验室的现状和抗体水平,通过改变包被方法,优选出适合技术参数需要的产品,并稳定下来; 3、为以后试剂盒的开发奠定体系,并能从中吸取开发新试剂盒的经验和教训; 4、以此项目为契机,构建团队体系,打造团队协作的运作模式。 二、要求达到的技术指标: 1、灵敏度:0.1ppb; 2、回收率:70-110%; 3、精密度(变异系数):<15%; 4、稳定性:试剂盒能4℃保存12个月时间没有明显变化; 5、除洗涤液...
阅读全文
0+
发表于825 天前 实验, 资源 ⁄ 被围观 7,689+
  EnVision是DAKO公司推出的一种两步法免疫组化技术,又称为ELPS法。 EnVision比SP,ABC一般的显色比较: 1 要敏感很多,定位比较好:EnVision系统是将二抗和酶联接成一个多聚体(即EnVision)直接放大信号40-50倍,再与已经结合的一抗反应,最后显色剂显色。采用该法可将一抗稀释度提高1~2倍,尤其对抗原表达较弱组织。也有人说SP法敏感度比EnVision高1-2倍,但SP法毕竟不宜用于富含亲生物素物质的组织。 2 非特异性背景少: EnVision法是多聚物上连接二抗和酶,在组织中不含有这种多聚物,从而避免了组织中生...
阅读全文
×
腾讯微博