强人实验之小鼠线栓中风(MCAO)模型
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声明:本文纯属转载,原文链接为丁香园:手把手教你做小鼠线栓中风(MCAO)模型(可能想要登录后才能查看),感觉比较强,特转载过来!不要问我什么是栓中风,俺不知道,不要问我什么是动物模型,知道一点也不告诉你,自己去搜索!

1.原理
大脑中动脉栓塞模型并不是把线栓插进大脑中动脉,而是经颈内动脉入颅并插入大脑前动脉,从而阻塞来自栓塞侧的大脑前动脉的血供,以及堵塞接受后交通动脉血供的的颈内动脉颅内。
大脑前动脉通过前交通动脉和对侧大脑前动脉相连通,颈内动脉通过后交通动脉和基底动脉相连接

2.栓线的选择
线栓制作的好坏是模型成功的关键。文献报道尼龙线多用5-0插小鼠,蛛网膜腔出血几率很高。一般用6-0的,6-0的裸线我经过多 次尝试虽能梗死,但极不稳定,大多数情况没有梗死(我想这是因为6-0的线的直径也许比血管稍小,但是考虑到动态血管在泵血的过程中直接是会有一定扩张 的,这两个因素加起来就可能导致栓线堵不死血管,6-0的线当然也有好处在插入时不至于与血管摩擦太大)。
目前我们用硅橡胶包裹的栓线做pMCAO模型,只要线做得好,成功率接近100%,非常稳定。用鱼线也是可以的,只要直径差不多就行。
栓线的头要接近火源炀成钝性的(最好用拜佛的香,不行用小木棍),头
不用烧得太大,要知道烧头是为了不让锐利的线头戳破血管,而不是为了让那圆头去堵住MCA的根部,所以头烧得越大越没用。一般直径0.12mm左右吧。

3.栓线的标记;
栓线切割成2cm(其实1.5cm就够了,反正是要剪掉的。2cm你在×25倍镜下最多给你看到1cm, 先入为主,那就2cm吧)。
在1cm处用marker笔标记这一步必须得做,因为插到接近1cm 处要非常小心了,一般0.8cm那线头就到了MCA入口,然后靠着显微镊与线的极小摩擦力继续插线,一边感受随时可能出现的轻微的阻力,一有阻力,立即停止,此时线头已经在大脑前动脉了。

4.栓线包裹硅橡胶
硅橡胶凝固原理是吸收空气中水份,凝固很快,我们的做法是将2ml注射器接到PE-20(或用1ml注射器接PE- 10),倒抽硅橡胶,立即将6-0的线插入,使其沾上硅橡胶。最后风干。最后选取半透明沾有薄薄一层硅橡胶的线,那种一眼望过去就是乳白色的线,一般是过 于粗的。(你要是实在不放心你的线是不是会太粗,取一只30g左右的小鼠,血管分离好后,将每根制作好的线栓都插入进去,顺利的留下,插不进去的或太细的 丢弃。)
有人用指甲油,小鼠没有一只是活的,毒性太大;
有人用石蜡,容易脱落,不好包,要么不够厚,要么太厚。
有人用清漆,我没试过,估计也有毒。
5.其他需准备物品
拉钩、特殊尺、显微镊、3-0和5-0的缝合线、直尺等
6.小鼠品系的选择
C57BL6基因最稳定。有文献报道,C57BL6由于天生后交通动脉缺陷,因此易中风,是练手的绝佳材料,缺点价格贵。
CD-1小鼠,繁殖能力强,所以便宜,但肚子大,脂肪多,麻醉苏醒快,水合氯醛一般最多1小时就会有痛觉,麻药要比标准计量多个1/4左右。建议氯胺酮或异氟烷
7.腹腔麻醉
氯胺酮麻醉效果最好,因为术后不容易死亡,但控制严格;水合氯醛、戊巴比妥钠能麻3小时左右,但死亡率高;异氟烷死贵,一瓶700 块,做不了几只动物,不走黑道你是搞不到这东西的。图中使用了7%的水合氯醛。给药量是0.05ml/10g, 一般30g左右的小鼠打0.15ml左右。
8.手术过程
开始解剖之前要做的事情就是测血流。将多普勒血流仪的探头放置于前囟(白色箭头)旁3.5mm,正规操作是将探头放到立体定位仪上,然后测。不过,个人觉得这样既费时间,又不准,还是自己用手准确。
(测血流准不准?准的。血流基本上都能从300多降到30多。术前要测,术后也要测,假如术后血流还有100多,那铁定没梗死,还要打开颈部肌肉从新插的。)
如上图固定小鼠,将小鼠的舌头拽出,用线固定住嘴巴防止上翘,在脖子下固定插入适当的填充物(否则颈动脉会陷得非常深)。
做颈部正中切口,切口从小鼠长有三根胡子的下巴一直到接近颈部的一块骨头(暂时称为喉结吧,开口尽量大),就可看见小鼠的胸骨舌骨肌,下面就是气管。建议作正中切口,这样颌下腺(很多人称这为甲状腺)容易钝性分开。
依次如下图操作
用拉钩将小鼠左侧皮肤拉开,就可见到胸锁乳突肌和二腹肌,还有一块小肌肉(下图左弯镊夹住的那块)。其实,此时你将斜方肌用镊子提起来(如下图左)就可以 看到粗大、在搏动的粉红的颈总动脉CCA(这种方法让你找CCA会事半功倍)。分离出CCA后,先穿一根3-0的线(如上图右此根线用5-0的话,你会发 现线会嵌入血管里面,导致最后结节的时候戳破CCA)注意右边与CCA平行并紧贴CCA的Vagus,要把它分到一边去。)
Vagus有一股神经是斜跨CCA的,如果你有足够的技术能把栓线穿进颅内,建议不要分离这处血管和神经,在此处的头端和尾端各分离一处穿线,毕竟减少损伤能降低术后死亡率.最好是保留着,但也许你接下来血管不会太容易分离
向上分离出ECA,ECA的定义就是CCA直线的继续延伸,旁边会有斜向下的分叉,那就是ICA了。小心分离出ECA。插三根5-0线进去(此处用 5-0,3-0的太粗啦,一根用来结扎ECA,扎得越上面越好;一根用来等会捆住栓线;一根等会扎ICA),提起位于CCA的3-0的线,将其中一根 5-0的线的一头从CCA下面绕到ICA。
最后一次结扎各血管,但留那根预备捆血管的线,只打虚结不扎紧。
插入栓线至CCA的分叉处,剪断ECA,将栓线掰成如上右图所示方向
将线尽量朝偏左部插,因为做的是左侧,ICA在左侧,朝右的话就有可能进入翼腭动脉(PPA)。PPA是ICA,比入颅ICA更粗的一个分枝,线一不小心 就会插入此血管。插了线后只要一扒就能看见线是否错误地插入PPA(因为线头是白色的);还有个检验方法是,要是真进了PPA,你插不到1cm的,而且线 会极度扭曲。
最后测血流,如降至原来的15%-10%以下,可认为模型成功,缝合皮肤,否则再重插。
大功告成。tMCAO只要将线栓拔出至CCA分叉处就可以了。

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