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找生物之分子生物实验常识
发表于143 天前 技巧 暂无评论 ⁄ 被围观 517+

1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇?
保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
2.如何将不同构型的质粒DNA区别开?
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同,ccc DNA的泳动速度最快,通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。
3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?
异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
4.用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子?
用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。
5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍,有什么作用?
RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏,使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活,使释放出的RNA不被降解。
6.蛋白印迹中封闭液的作用?
封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位,以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。
7.DNA通常保存在什么缓冲液中?
采用TE缓冲液,Tris-HCl的缓冲系统,加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性,对DNA起到保护作用。
8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA?
通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。
9.简单的克隆载体必需包括什么?
复制起点;选择标记:主要是抗性基因;多克隆位点:便于外源DNA的插入。
10.用酚抽提细胞DNA时,有什么作用?
使蛋白质变性。
11.在分离DNA时,要使用EDTA,为什么?
EDTA是金属离子螯合剂,螯合二价离子,抑制核酸酶的活性。
12.在分离DNA过程中,造成DNA分子断裂的因素有哪些?
核酸酶降解;化学降解;物理剪切。

本篇由找生物整理自科学网http://bbs.sciencenet.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=3778

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