小技巧之分离病毒颗粒
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中国科学院广州生物医药与健康研究院的林锦梅介绍了一种分离病毒颗粒的生物实验技巧。

背景:基因治疗现今取得了显著的进步,基因治疗中腺病毒载体的发展必需借助于两种技术,第一种是在来自所用病毒构建和扩增步骤的样品中定量测定病毒 颗粒的高选择性高敏感性的快速方法,这一点对病毒原种生产方法的优化特别重要;第二种是纯化病毒颗粒的易于推广至工业规模的简单、可靠、可重复的方法。本 研究涉及一种对病毒颗粒进行纯化的新方法。具体在于样品预处理,让病毒释放完全,减少水解蛋白酶的污染。提高病毒回收率和纯度。

方法改进:根据病毒来源选择不同萃取方法,机械或化学溶胞而制得体积小,容易操作;但是化学 溶胞又引入新的物料,增加后续分离纯化工作量。而等到细胞自溶自动释放病毒颗粒,在上清收集,一个是时间性,另外一个是体积大需估计柱载量的限度对纯化成 本的影响。传统的机械溶胞是采用通过3~6个连续的解冻循环(-70℃乙醇干冰。37℃水溶)从核中释放病毒,如此获得的病毒释放不完全,而且重复性差。 综上所述根据情况考虑对纯化路线进行改进。超声细胞破碎使用温和,减少步骤,在室温下能快速处理样品,机械溶胞需要摸索合适强度减少蛋白酶的释放。从数据 分析,病毒峰超声1分钟比较适合。腺病毒是一个脆弱东西,超声时间过长对影响很大,另外也增加水解蛋白酶的释放。超声时间过短,核酸类物质不能完全打断, 容易与目标蛋白结合成复合物改变电荷,使重复性差。

结果:超声溶胞从实际工作需要出发,快速,微量,费用低廉,技术要求不高,操作安全。实现费用与效益双赢。实现用一般常规实验能够完成的测定,不必使用贵重精密仪器。检验员经 训练能较好掌握某种测定方法,实验时间缩短。“简单易学”在一定程度上意味着能保证检验质量。

ps:关于病毒颗粒

病毒颗粒(Virion)为在细胞外发现的完整的病毒粒,能以结晶形式存在,并感染活细胞,由含遗传物质的核状小体和衣壳组成。

 

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