小技巧之冻存和复苏细胞
发表于305 天前 技巧 评论数 4 ⁄ 被围观 1,416+

找生物好久没有写生物实验小技巧系列的文章了,主要是因为江郎才尽(本来就没有什么才!),没有合适的资源可以搜索到,今天的一篇关于细胞冻存复苏的小技巧是来自国外的一篇文章,找生物稍作翻译。
在着手开始建立新细胞库之前应该完成的时间:

活力检查 – 千万不要使用不健康的细胞,可能有污染(真菌、支原体等),如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!
形态检查 – 检查细胞的固有形态和生长行为。
好了,开始切入正题
冻存细胞:
补充新的培养液 – 在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。
在细胞长至70%单层时收获细胞,计数活细胞数,用冻存液调整细胞密度 ~5 x106 cells/ml (根据不同的细胞类型调整)
冻存液 – 用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞,有不同类型的冻存液,根据细胞类型选择最合适的冻存液(常用的冻存液成分有):
- 5-10% DMSO – 注意确保DMSO不含有其他的毒性物质.
- 5-15% 甘油
- 如果细胞在无血清培养基内生长,应在50%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长24小时)内冻存和复苏。

在冻存管上标记好细胞类型,日期,冻存人等信息,并保证每冻存管不超过1.5ml.
程序降温是保证冻存细胞活性的关键,使用 Mr. Frosty(找生物注一种装置)保证降温速度为1°-3°C,置于-80°C冰箱内过夜,如果没有Mr. Frosty装置,可以使用实验室常见的泡沫盒、棉花等(原文是实验室尿布,呵呵,不知道是什么鸟).
放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以最快的速度转移冻存管知液氮罐内,因此,此步骤最好使用干冰,或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意,在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息,做好记录是非常非常重要的!
还有一个最重要的,一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞,以免其中的一个液氮罐出现问题!

细胞复苏-正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要,熟记以下要点:
当从液氮罐内取出细胞时,有可能会出现冻存管破裂的情况,使用保护面罩和防护服十分必要(找生物注国内这个方面做得非常不好吧)
从液氮内转移冻存管至热的(温度高的)容器内,应在液氮内完成(?)
应该与37℃水浴中快速溶解冻存的细胞,并保证冻存管盖子在水面之上以避免污染。当最小的冰块溶解后,用70%酒精擦拭冻存管,并迅速转移至新的已经预热的培养基内。
观察细胞生长形态和生长比率。

各位童鞋,找生物翻译的这篇文章其实并无新意,与咱们平时看到的细胞冻存、复苏并没有很大的差异,权当是复习知识了。

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