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发表于361 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,755+
小技巧之确定RNA质量
RNA提取的质量直接影响下一步的实验操作,如何快速确定(判定)RNA的质量才能保质、节省时间,找生物整理如下: 1)检测RNA溶液的吸光度 (常规操作,地球人都知道) 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.8——2.0时,认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要留意,当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时,R值可能会大于2(一般应该是<2.2的)。当R<1.8时,溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较...
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发表于389 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,637+
透析的基本原理 透析是一个简单的扩散过程,溶质中小分子物质从高浓度溶液通过半透性膜扩散到低浓度溶液中,直至渗透压达到平衡。由于多孔膜的选择性,使得溶质中小分子物质可以通过,而较大物质则被截留,从而分离出不同大小分子量的物质,依据分子量大小截留,可高效用于分离工艺,改变或控制透析的条件,可在多种透析应用中得到预期效果,通过截留分子量(MWCO)可使目标分子得到分离。如图 透析袋透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析袋透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的...
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发表于396 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,899+
1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇? 保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。 2.如何将不同构型的质粒DNA区别开? 由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同,ccc DNA的泳动速度最快,通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。 3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加...
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发表于397 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,101+
小技巧之避免牛血清沉淀
各位童鞋在细胞培养过程中,应该遇到过使用的牛血清产生沉淀的问题,溶解后有沉淀,往往还怕是染菌,即使不是染菌有些沉淀在细胞瓶内也会影响生长,注意一些小的细节还是非常有必要的: 一般推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),非常容易产生沉淀物。 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较...
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发表于404 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,907+
以前找生物转载过一篇强人实验之小鼠线栓中风(MCAO)模型的博文,采用图文的方式介绍了小鼠MCAO模型的制作,现在介绍一篇关于此的实验技巧: (1)栓线:医用锦纶单丝线,上海浦东金环医疗用品有限公司,型号5-0。 关键点:头部烧圆,直径在0.23-0.24mm (游标卡尺量过),动物大小25-30g, 直径小,症状非常轻,直径超过0.25 mm,很难进入颅内,插线有困难,勉强进入后,动物损伤重,易死亡。 (2)麻醉:麻醉不能过深,不然在分离颈总动脉,牵拉迷走神经和气管时,动物易死亡。 (3)分离颈总动脉:动物之间差异大...
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发表于404 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,246+
小技巧之琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳对于现在的生物学操作就是小儿科,但是下面的一些小技巧您知道吗? 1 凝胶制作 1.1 给胶补点水:在日常的实验中一般都是一次多配点凝胶,下次融后直接使用。但有没有注意随着融化次数的增加,水分丢失也越多,凝胶浓度则会越来越高,导致实验结果不稳定。 补水办法:一是在容器上标记煮胶前的刻度,煮胶后补充相应的水分至原刻度;二是在煮胶前称重,煮胶后补充水至原重量。粗略一点的方法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值。以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。核酸染色剂溴化乙锭(EB)可...
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发表于414 天前 实用, 技巧 ⁄ 被围观 2,144+
今天找生物送上的不算是实验方面的小技巧,是关于资源获取方面的,对于文献的检索确实是个大学问,找生物以前也是花了不少的功夫,但也学了些皮毛,像找个期刊库入口、密码等,简单的使用代理等,工作后用的较少了,武功基本也是全费了。当时的关于文献检索方面的论坛也是不少,比如丁香园(改邪归正了,哈哈)、零点花园、小木虫等等很多的。 今天这篇文章是我上网偶遇的,转载一下吧(来源:科学网http://bbs.sciencenet.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=209879&extra=page%3D2): 1.澳大利亚国立大学...
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发表于419 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,841+
背景: 在生物实验中相信大家都经常要倒平板,细菌培养,分子生物学实验等等。医药企业中倒平板更是家常便饭,环境监测、水监测、微生物检查等,初学者往往都倒不好,找生物总结几点小技巧供大家参考: 方法: 一、防止倒皿时的冷凝:  1、有经验的都知道,手心不烫手背烫,这是一个经验数据,此时的温度在45度左右,最适合倒平板。  2、如果要连续倒多个皿,尤其是在冬天往往容易凝固,一旦凝固则需要再加热到较高温度才能溶化(玻璃体的特性)。所以建议此时有个50度的恒温水浴开着,随时把装培养基的三角瓶放...
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发表于421 天前 技巧 ⁄ 被围观 2,077+
背景: 实验室里常会有玻璃仪器的磨口部位因粘固而打不开,采取撬、砸等等方法,还怕打碎了。 解决方法: 1.敲击: 用木器轻轻敲击磨口部位的一方,使其因受震动而逐渐松动脱离。对于粘固着的试剂瓶、分液漏斗的磨口塞等,可将仪器的塞子与瓶口卡在实验台或木桌的棱角处,再用木器沿与仪器轴线成约70°角的方向轻轻敲击,同时间歇地旋转仪器,如此反复操作几次,一般便可打开粘固不严重的磨口。 2.加热: 有些粘固着的磨口,不便敲击或敲击无效,可对粘固部位的外层进行加热,使其受热膨胀而与内层脱离。如用热的湿...
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发表于423 天前 技巧 ⁄ 被围观 1,488+
背景知识 在用96孔板做ELISA或其他测定时,加板、洗板过程中经常会产生许多气泡。这些气泡会在一定程度上影响试验结果,令人烦不胜烦。 解决方法 1. 用tip吸走,费事、效果还不是很理想。 2. 采用更好材质的板、或采用专门的96孔板振荡器,需要花费更多的money! 3.注射器针头扎破,费事,同方法1. 4.用吹风机(理发店吹头发带加热的那种),将吹风机打开,并调节到最高温度,对96孔板吹1-2秒就可以了。 以上主要参考了美国Helen Diller癌症中心的翁博士的建议:http://www.ebiotrade.com/newsf/2010-6/201061217...
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