生物技巧之正确使用DEPC
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今天讲讲DEPC,介个东东让人又爱又恨的,还是讲讲如何正确使用它吧!DEPC有致癌性,不能处理Tris溶液等这些事项大家都知道,所以不谈。谈一些实验室中的操作误区。

误区一:重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。由于DEPC较贵,而且书上说DEPC要用高压灭菌处理去除,于是有些人就萌发了重复使用DEPC的想法,即对含有DEPC的水不进行高压灭菌,从而重复使用含DEPC的水处理枪头、离心管等。节约本是好事,但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含DEPC的水,因为DEPC在水溶液中不稳定,极易分解,DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS缓冲液中的半衰期分别约为20min和10min,DEPC在水中的半衰期约为30min。因此,重复使用含DEPC的水就不能保证枪头和离心管的RNase-free。

误区二:必需长时间高压灭菌来彻底去除DEPC。用DEPC处理过的溶液,在15-20min的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味,因此有人认为高压灭菌去除DEPC不彻底,所以要延长高压灭菌的时间以完全去除DEPC。但是延长高压灭菌的时间并不需要,因为闻到的特殊香味不是DEPC的,而是DEPC分解产物之一的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸(如甲酸和乙酸等)反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的DEPC残留。

误区三:溶液中DEPC含量约高,灭活RNase的效果越好。这个误区错了一半,的确,1% DEPC能灭活高达1000 ng/ml的RNase A,而0.1% DEPC只能灭活少于500 ng/ml的RNase A。但是溶液中残留的DEPC副产物会抑制一些酶反应,例如DEPC副产物会抑制体外转录反应,因此DEPC含量越高,高压灭菌后的DEPC副产物就越多,抑制越明显。

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