小技巧之确定RNA质量
发表于361 天前 技巧 评论数 2 ⁄ 被围观 1,755+

RNA提取的质量直接影响下一步的实验操作,如何快速确定(判定)RNA的质量才能保质、节省时间,找生物整理如下:

1)检测RNA溶液的吸光度 (常规操作,地球人都知道)
280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.8——2.0时,认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要留意,当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时,R值可能会大于2(一般应该是<2.2的)。当R<1.8时,溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显,你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R>2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了。

2)RNA的电泳图谱
一般的,RNA的电泳都是用变性胶进行的,但假如你仅仅是为了检测RNA的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的,用普通的琼脂糖胶就可以了。
电泳的目的是在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值,或者是mRNA smear的完整性。一般的,假如28S和18S条带明亮、清楚、条带锐利(指条带的边沿清楚),并且28S的亮度在18S条带的两倍以上,认为RNA的质量是好。

以上是常用的两种方法,但是这两种方法都无法明确的告诉我们RNA溶液中有没有残留的RNA酶。假如溶液中有非常微量的RNA酶,用以上方法很难察觉,但是大部分后续的酶学反应都是在37度以上并且是长时间进行的。这样,假如RNA溶液中有非常微量的RNA酶,那么在后续的实验中就会有非常适合的环境和时间发挥它们的作用了,当然这时你的实验也就over了。

下面,隆重介绍一个可以确认RNA溶液中有没有残留的RNA酶的方法。

保温试验

方法很简单的,按照样品浓度,从RNA溶液中吸取两份1000 ng的RNA加进至0.5 ml的离心管中,并且用pH7.0的Tris缓冲液补充到10 ul的总体积,然后密闭管盖。把其中一份放进70℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。

时间到了之后,取出两份样本进行电泳。电泳完成后,比较两者的电泳条带。假如两者的条带一致或者无明显差别(当然,它们的条带也要符合方法2中的条件),则说明RNA溶液中没有残留的RNA酶污染,RNA的质量很好。相反的,假如70℃保温的样本有明显的降解,则说明RNA溶液中有RNA酶污染。

怎么样,还不错吧?

本篇找生物整理自网络,无明确的作者来源http://www.chinabaike.com/smkx/185792.html

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