WB过程中如何保证完美的蛋白转印
发表于255 天前 技巧 评论数 3 ⁄ 被围观 1,490+

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WB是大家比较常做的实验,关于WB的技巧网上描述的也比较多,今找生物继续关注WB的实验技巧!

在WB过程中从SDS-PAGE胶上转移蛋白至膜上是非常关键的步骤!优化转移时间往往需要实验多次,下面就讲几条关于如何保证蛋白完全转移的小技巧,适合新手参考:

  • 使用预染的marker.  预染marker不仅能够直观的观察到跑胶情况,而且在转移过程中也是很好的工具,在完成印迹后观察膜上的  marker ,看是否所有条带都已经转移至膜上。
  • 在转印装置中加两块膜 小分子量的蛋白转移的比较快,而为保证大分子蛋白的转印,长时间的转印可能使小分子担保透过膜,因此,加入两块膜是个明智的选择,如果能在第二块膜上检测到小分子蛋白,说明转印时间过长。
  • 在转印后对胶染色.  如果转印时间不够的化,通过对胶染色,在胶上能够观察到未转移完全的蛋白,这种情况在转印大分子蛋白是常见,使用银染或者考马斯亮蓝的方法都可以。

以上只是一些小技巧,充分利用便于分析结果,节省你的时间!
此外找生物也找到一片关于WB技巧的一个实验视频,供参考!

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