PCR引物设计黄金法则

    1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因,通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment),各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3.引...
    作者:木木 | 分类:网站教程 | 阅读:1742 点击 | 标签:

    引物设计重点因素及设计技巧

    想把引物合成的比较好,除了前引物和后引物的Tm不能相差太大,我们还要重点考虑以下因素: 一、GC含量 引物的GC含量一般为40-60%,以45-55%为宜,过高或过低都不利于引发反应。有一些模板本身的GC含量偏低或偏高,导致引物的GC含量不能在上述范围内,这时应尽量使上下游引物的GC 含量以及Tm 值保持接近(上下游引物的GC含量不能相差太大),以有利于退火温度的选择。如果G-C比例超出,则在...
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    Primer 3 在线引物设计攻略

    百度文库上面分享的Primer3在线引物设计攻略,在线引物设计网站Primer3 可以在此浏览实用 开始之前:其实非常简单,不需要你下载任何软件,但是你得有一台电脑能上网。当然,最重要的是,你要很清楚用于做引物的模板序列,至于怎么找模板序列,不再本次讨论范围。另外,要先对PCR目的序列的长度有个大致估计,好了,马上开始吧: 第一步:找到Primer3的站点。你不用记住这个站点,但是要记...
    作者:木木 | 分类:网站教程 | 阅读:11,024 点击 | 标签:,