正确保存抗体,你了解吗?
发表于1078 天前 实用 暂无评论 ⁄ 被围观 3,331+

抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果!如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
请谨记!无论何时(请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体)
1. 收到抗体后请务必在12000rpm离心1-5分钟后再打开管盖进行分装和保存(如果抗体体积小于50ul,请延长离心时间至5分钟,以保证全部抗体均离心下来)!
为了昂贵&珍贵的抗体,请看清是12000rpm
2. 对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在 -20℃ or -80℃ 。
l对绝大多数抗体来说,保存在-20℃是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!
l 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
l 分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响
l 复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来!
l 抗体工作液应该当天配制当天用完,在4℃ 尽量不要超过1天。
l 绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层,而不是门上

均是教训得来的啊~~~

3. 大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快(1-2周)会使用,推荐在4℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则最好是在-20℃ or -80℃。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体!
但是,腹水形式的产品请在收到后立即冻起来!因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在4oC保存会导致抗体的降解!
4. 大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2周的时间,所以是在4℃的条件下来完成的。
   4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻。这就多了一次冻融的过程)。所以运输过程中绝对避免干冰运输!

特殊抗体的保存条件:

l        酶联抗体:永远保存在4℃,避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失
l        偶联抗体:所有偶联抗体都需要在棕色管中或使用锡箔纸避光4℃保存。尤其是荧光抗体,对光极为敏感,因此在所有的实验阶段也是要避光操作的!
l        IgG3的同型对照:永远保存在4℃,避免冻起来。因为如果出现冻融过程,该抗体非常容易形成多聚体

(无论是保存还是运输,绝对避免反复冻融)

反复冻融会导致抗体变性,导致多聚体形成,从而降低抗体的结合能力!
抗体保存其它相关信息:
关于加入甘油保存:
有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融,甘油在-20℃ 会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。加入甘油的溶液不建议在-80℃保存,因为这已经超过了甘油的冰点。如果您要加入甘油来保存抗体的话,请谨慎注意无菌操作,避免污染!
关于蛋白保护剂:
蛋白在高浓度时更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
关于叠氮化钠(sodium azide)的使用:
为了防止微生物污染,叠氮化钠经常被加入到抗体中(终浓度0.02% (w/v))。Abcam的很多抗体已经含有了0.02%-0.05%的叠氮化钠,在说明书的“Storage buffer”中有标明的。
在下述情况中不能使用叠氮化钠:l        
如果抗体用于染色或处理活细胞,用于体内研究:
叠氮化钠在抵抗微生物的同时,对其它大部分有机物也是有毒的,因为它阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.
l        要偶联带有氨基基团的抗体:
叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联,因此在进行偶联之前,应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存,但是浓度只能是0.01%。对于需要偶联的抗体,thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂!

注:叠氮化钠的去除方式:
可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除!IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除

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